Вируспен өсімдіктің арақатынасын зерттеу және вирус материалды оңалту мақсатында, ие жасушаларының РНҚ-интерференциясын төмендететін картофелдің S вирусының белоктарын айқындау
Руководитель проекта: Карпова Оксана Владиславовна
Исполнители проекта:
Организация: Институт молекулярной биологии и биохимии им. М.А.Айтхожина
Инвентарный номер: 0218РК00630
Регистрационный номер: 0118РК00962
Ключевые слова:
"Основным объектом исследования является геномная РНК (гРНК) S вируса картофеля (PVS).
Цель проекта - установить специфические белки S-вируса картофеля (PVS), вызывающие супрессию процесса РНК-интерференции (RNAi) в зараженных клетках растения-хозяина, используя методы генной и клеточной инженерии.
В работе применены методы компьютерного анализа вирусных белков и нуклеиновых кислот, методы выделения РНК, реакции обратной транскрипции (РОТ), ПЦР, электрофореза нуклеиновых кислот в агарозном геле, метода молекулярного клонирования и ИФА (DAS-ELISA) для определения степени заражения растительного материала вирусами.
Проведен компьютерный анализ гРНК PVS с целью выявления консервативных нуклеотидных последовательностей, наиболее перспективных для ингибирующего действия RNAi. В результате последовательности пяти открытых рамок считывания (ОРС) гРНК PVS были выбраны мишенями для действия RNAi. Были проанализированы кодирующие последовательности ОРС2, ОРС3, ОРС4, ОРС5 и ОРС6 гРНК PVS, проведен компьютерный дизайн и химический синтез праймеров для последующей амплификации и секвенирования указанных ОРС, кодирующих белки PVS. Выделен препарат гРНК PVS из листьев растений картофеля, показавших положительный ответ на присутствие инфекции PVS. Отсеквенированы (определены) нуклеотидные последовательности гРНК двух казахстанских изолятов. Амплифицированы ДНК-фрагменты, содержащие нуклеотидные последовательности ОРС2, ОРС3, ОРС4, ОРС5 и ОРС6 гРНК PVS.
По результатам проведенной работы имеется 6 публикаций, включая 1 статью в журнале, рекомендованном ККСОН МОН РК, 1 тезис международной конференции ближнего зарубежья, 2 тезиса международных конференций, проведенных в Казахстане, и 2 одобренные заявки на патент РК.
Область применения: биотехнология и генная инженерия растений и сельское хозяйство.
"