"Объект: E.coli, кДНК гены, кодирующие AtPARP1 и AtPARP2 Arabidopsis thaliana Цель работы: Выделение и функциональная экспрессия кДНК генов, кодирующих АtPARP1 и AtPARP2 Arabidopsis thaliana с гистидиновым концом (6хHIS) в клетках E.coli и очистка с помощью никель-аффинной хроматографии. Методы исследования: Выделение нуклеиновых кислот, Обратная транскрипция, полимеразная цепная реакция, Рестрикция фрагментов ДНК и плазмидного вектора; Элюирование гена из агарозного геля; Лигирование очищенных фрагментов и вектора; Приготовление компетентных клеток E.coli; Трансформация клеток плазмидной ДНК; Индукция экспрессии ферментов; Электрофоретическое разделение белков в ДСН-ПААГ и иммуноблотинг; Очистка рекомбинантных ферментов аффинной хроматографией; Масс-спектрометрия. Результаты: Нами были выделены кДНК гены AtPARP1 и AtPARP2 с применением реакции обратной транскрипции (РОТ) и полимеразной цепной реакции (ПЦР). Осуществлена функциональная экспрессия AtPARP1 и AtPARP2 гистидиновым концом в E. cоli и очищена никель аффинной хроматографией до гомогенного состояния. С помощью MALDI-TОF масс-спектрометрии установлена принадлежность рекомбинантных белков к семейству поли(АДФ-рибоза) -полимераз. На основе очищенного рекомбинантных белков были получены поликлональные антитела к AtPARP1 и AtPARP2. AtPARP1 и AtPARP2 в присутствии олигонуклеотидного дуплекса с разрывом и НАД+ показали авто-поли(АДФ-рибозил)ирующию активность. Сведения о внедрении: нет Научно-организационная работа: Количество опубликованных статей и тезисов - 3, участие в конференциях - 2, количество докладов - 1. Область применеия: Молекулярная биология и биотехнология "