"Объект исследования: E.coli, кДНК ген, кодирующий RHT-D1А Triticum aestivum. Цель: Выделение и функциональная экспрессия кДНК гена, кодирующего DELLA белка пшеницы RHT-D1 с гистидиновым концом (6хHIS) в клетках E.coli и очистка с помощью никель-аффинной хроматографии. Методы исследования: выделение нуклеиновых кислот, обратная транскрипция, полимеразная цепная реакция, рестрикция фрагментов ДНК и плазмидного вектора, элюирование гена из агарозного геля, лигирование очищенных фрагментов и вектора, приготовление компетентных клеток E.coli, трансформация клеток плазмидной ДНК, индукция экспрессии ферментов, электрофоретическое разделение белков в ДСН-ПААГ и иммуноблотинг, очистка рекомбинантных ферментов аффинной хроматографией, масс-спектрометрия. Результаты: В представленной работе выделена кДНК гена Rht-D1а с применением реакции обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции. Осуществлена функциональная экспрессия Rht-D1а с гистидиновым концом в E. cоli и очищена никель-аффинной хроматографией до гомогенного состояния. С помощью MALDI-TОF масс-спектрометрии установлено полное совпадение аминокислотной последовательности рекомбинантного белка с первичной структурой Rht-D1а белка Triticum aestivum. Выявлено, что продуктом экспрессии гена является глобулярный белок массой 65,3 kDa, состоящий из 623 аминокислот (pI=4,99). С применением очищенных рекомбинантных белков RHT-D1а были получены поликлональные антитела и выявлена их специфичность к Rht-D1а белку пшеницы. Полученные нами очищенный Rht-D1а белок и специфичные к нему поликлональные антитела подходят для дальнейших структурных и функциональных исследований, которые будут способствовать четкому пониманию механизма регуляции роста растений через Rht-D1a белки. Сведения о внедрении: нет Научно-организационная работа: Количество опубликованных статей - 1. Область применения: Молекулярная биология и биотехнология"