Исследование молекулярных механизмов взаимодействия вируса и растения: выявление белков М вируса картофеля, подавляющих процесс РНК-интерференции клеток хозяина
Руководитель проекта: Айтхожина Н.А.
Исполнители проекта: Искаков Б.К.*
Организация: Институт молекулярной биологии и биохимии им. М.А.Айтхожина
Инвентарный номер: 0214РК01853
Регистрационный номер: 0112РК00463
Ключевые слова: вирусы*генная инженерия*молекулярная генетика*белки*
Исследован фитопатогенный М-вирус картофеля (МВК или PVM от potato virus M), его геномная (г)РНК, а также вирусные белки, способные супрессировать клеточный процесс РНК-интерференции (РНКи) с целью установления специфических белков М-вируса картофеля, которые вызывают супрессию процесса РНК-интерференции в зараженных клетках растения-хозяина. Целевые фрагменты гРНК PVM, кодирующие белок оболочки (ОРС34К) и цистеин-богатый белок (ОРС11К) амплифицированы с помощью реакций РОТ и ПЦР. Налажен оптимальный температурный режим для амплифицирования каждой ОРС. Амплифицированные фрагменты гРНК PVM (ОРС25К, ОРС12К, ОРС7К, ОРС34К и ОРС11К) клонированы сначала в бактериальных, а затем в растительных векторах. Создана ДНК-конструкция под контролем конститутивного 35S-промотора, в которой последовательность ОРС3 в прямой и обратной ориентации расположена соответственно с 5' и 3' флангов от интрона растительного гена. Аналогичная рекомбинантная конструкция создана с последовательностью ОРС5. Впервые идентифицированы белки PVM, наиболее интенсивно супрессирующие РНК-интерференцию: 12К-протеин (ОРС3) и белок оболочки (ОРС5). Меньшую супрессорную активность имели 25К-протеин (ОРС2) и 11К-протеин (ОРС6), а белок, кодируемый ОРС4 (7К-протеин) супрессорной активности не проявлял. Теоретические результаты, а также клонированные кДНК-фрагменты гРНК PVM и рекомбинантные конструкции, созданные на их основе, могут найти применение в генной инженерии и биотехнологии растений для создания новых исходных линий картофеля с генетически закрепленной устойчивостью к PVM. Результаты можно использовать для получения новых сортов картофеля с полной устойчивостью к М-, S- и Х- вирусам.*